糖原染色是病理学中常规的染色方法之一,McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该技术不仅能显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基,使之变为二醛,醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化,这是很关键的步骤。
糖原PAS染色液(细胞专用)特点是采用特有配方技术,大大增强了染色效果;性能稳定,特异性强;操作简捷,仅需1h; 过碘酸、苏木素浓度更低,更适用于细胞、超薄组织切片染色;无盐酸乙醇分化步骤。该试剂适用于科研领域,不适用于临床诊断。
自备材料:
1、系列乙醇
2、蒸馏水
操作步骤(仅供参考):
1、 细胞、骨髓涂片用PAS固定液固定10~15min。
2、 水洗、晾干。
3、入过碘酸溶液,室温氧化15~20min。
4、自来水冲洗2次,蒸馏水浸洗2次。
阴性对照(可选):
1、取淀粉酶1g溶解于PBS(pH5.3) 100ml,处理30~60min,与其他样本共同入过碘酸溶液。结果应为阴性。
2、(备选方案)取唾液片(过滤后用)处理30~60min,与其他样本共同入过碘酸溶液。结果应为阴性。
3、(备选方案)如果对照片采用其自身样本,对照片不经过碘酸溶液这一步,直接入Schiff Reagent。结果应为阴性。
注意事项:
1、 过碘酸氧化时间不宜过久,氧化时的温度以18~22℃最佳。
2、 过碘酸溶液、Schiff Reagent、苏木素染色液应置于4℃密闭保存,使用时避免接触过多的阳光和空气,使用前最好提前30min取出恢复至室温,避光暗处使用
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