糖原染色是病理学中常规的染色方法之一,McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该染色试剂盒不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基,使之变为二醛,醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化,这是很关键的步骤。
糖原PAS快速染色液的特点: 采用特有配方技术,大大增强了染色效果;性能稳定,特异性强;操作简捷,仅需40min左右。与常规糖原PAS染色试剂盒相比,少了苏木素染细胞核的步骤,大大提高了工作效率。适用于石蜡切片和冰冻切片。
自备材料:
1、蒸馏水
2、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
1、组织固定: 石蜡切片固定于Carnoy固定液较好,可在4℃下固定以为避免极化。小块组织2~3h,大块组织可以适当延长时间,但不宜超过18h。固定后的组织可直接用95%乙醇浸洗几次,然后入无水酒精脱水,再透明包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水。冰冻切片直接入蒸馏水。
3、自来水冲洗2~3min,蒸馏水浸洗2次。
4、入过碘酸溶液,室温氧化2~5min,一般不宜超过8min。
5、自来水冲洗1次,蒸馏水浸洗2次。
6、入Schiff Reagent, 置于室温阴暗处浸染10~20min(冰冻切片10~15min,石蜡切片可适当延长时间)。
阴性对照(可选):
1、取淀粉酶1g溶解于PBS(pH5.3) 100ml,处理30~60min,与其他切片共同入过碘酸溶液。结果应为阴性。
2、(备选方案)取唾液片(过滤后用)处理30~60min,与其他切片共同入过碘酸溶液。结果应为阴性。
3、(备选方案)如果对照片采用其自身样本,对照片不经过碘酸溶液这一步,直接入Schiff Reagent。结果应为阴性。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
2、 过碘酸氧化时间不宜过久,氧化时的温度以18~22℃最佳。
3、 过碘酸溶液和Schiff Reagent应置于4℃密闭保存,提前恢复到室温,避光暗处使用。
4、 在过碘酸溶液和Schiff Reagent中的作用时间非常重要,应该依据切片厚薄、组织的类别等决定。冷冻切片染色时间尽量要短。
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