糖原染色是病理学中常规的染色方法之一,McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该染色试剂盒不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。PAS技术是唯一可检测不同种类的黏液物质(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要准确鉴别黏液物质(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步骤。大多数情况下可用α–淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解,形成水溶性的双糖-麦芽糖,在应用PAS技术之前将糖原从组织切片上除去。
淀粉酶水溶液(1%,pH5.3)由淀粉酶、磷酸盐组成,主要用于糖原PAS染色之前切片处理。糖原消化时需要两张相同的切片,脱蜡后一张切片用a-淀粉酶水溶液(1%)处理,另一张仅用PBS或蒸馏水处理,然后两张切片均用PAS法染色,消化后染色消失表明存在糖原。
操作步骤(仅供参考):
1、两张相同切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇入水。
2、一张切片入37℃淀粉酶溶液处理1h。另一张不用淀粉酶溶液处理,入水中1h作为对照。
3、流水冲洗两张切片各5~10min。
4、进行糖原PAS染色步骤
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
2、 需使用一张阳性对照片验证酶的活性。
3、 避免接触过多的阳光和空气,使用前最好提前取出恢复到在室温后,避光暗处使用。
4、冷冻切片染色时间尽量要短。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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