淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质,可存在于不同的组织、器官,导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成,该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列,病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝,大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差,经典的而且有效的方法是刚果红染色,1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别,并应用到组织切片。后来经过Highman改良,染色效果更好。
淀粉样物质染色液(Highman刚果红法)主要由刚果红染色液和苏木素染色液组成。该试剂盒简单易行,染色液性能稳定,并且已经被广泛应用。
自备材料:
1、10%中性福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
1、常规固定,常采用10%的中性福尔马林,常规脱水包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水;冰冻切片直接入蒸馏水。如有必要,可以去除色素。
3、入Highman刚果红染色液,浸染5~10min。
4、碱性乙醇分化3~10s,立即入水终止分化。自来水冲洗。
6、入苏木素染色液,染细胞核1~2min。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
2、 碱性乙醇分化液应密闭保存,一旦开启尽快用完。
3、 分化时间应该根据切片厚薄、组织类别和分化液的新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够。
4、 碱性乙醇分化液分化步骤很重要,应及时入水终止分化,防止分化过度。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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