淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质,可存在于不同的组织、器官导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成,该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下,淀粉样物质呈原纤维排列,病例材料中为大量细胞外的、不分支的细丝,大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差,经典的而且有效的方法是刚果红染色,1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别,并应用到组织切片。后来经过Highman改良,染色效果更好。
改良Highman刚果红染色又称甲醇刚果红染色,主要由刚果红染色液和Mayer苏木素染色液等组成。该染色法性能稳定,并且已经被科研和临床领域广泛应用,推荐该法作为淀粉样物质染色的主要方法之一。
自备材料:
1、10%中性福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
1、常规固定,常采用10%的中性福尔马林,常规脱水包埋。
2、切片厚度4μm,常规脱蜡至水。
3、入改良Highman染色液浸染10min,弃余液。
4、Highman分化液分化2~5s,立即入水终止分化,水洗2次后镜下控制至恰当程度。
5、自来水冲洗5min。
6、入Mayer苏木素染色液,浅染细胞核1~2min或更短时间。
7、自来水冲洗10min。
8、逐级常规乙醇脱水。二甲苯透明,中性树胶封固。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
2、 Highman分化液应密闭保存,一旦开启尽快用完。
3、 改良Highman染色液染色时尽量采用浸染,如果滴染,应置于湿盒防止溶液挥发。
4、 Highman分化液分化步骤很重要。分化时间较短,胶原纤维也被染成红色;分化过度,淀粉样物质也被脱色。如果脱色过度,可以将切片清洗后重新用刚果红染色液浸染。
5、 脱水应迅速,避免脱色。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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