淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质,可存在于不同的组织、器官,导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成,该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列,病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝,大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差,经典的而且有效的方法是刚果红染色,1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别,并应用到组织切片。
淀粉样物质染色液(Puchtler碱性刚果红法)主要由刚果红染色液、苏木素染色液等组成。其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力,其羟基与刚果红的氨基结合,从而使淀粉样物质染成红色。该染色法性能稳定,是非常经典的淀粉样物质染色的方法。
自备材料:
1、10%中性福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、系列乙醇
4、Scott蓝化液
操作步骤(仅供参考):
1、常规固定,固定液没有特殊要求,常采用10%的中性福尔马林,常规脱水包埋。
2、切片厚度4μm,常规脱蜡至水。
3、入苏木素染色液,浸染5min。
4、酸性乙醇分化2~5s,立即入水终止分化,水洗2次后镜下控制至恰当程度。
5、自来水冲洗2min。
6、入Scott蓝化液或水洗返蓝。
7、自来水冲洗2min。
8、按氯化钠溶液: Puchtler碱化液=100:1的比例配制碱性氯化钠溶液,即配即用。切片入碱性氯化钠溶液,浸染20min。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
2、 酸性乙醇分化液应密闭保存,一旦开启尽快用完。
3、 刚果红染色液染色时尽量采用浸染,如果滴染,应置于湿盒防止溶液挥发。。
4、 碱性氯化钠溶液和碱性刚果红染色液即配即用,尽量在20min内使用。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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