淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质,可存在于不同的组织、器官导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成,该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下,淀粉样物质呈原纤维排列,病例材料中为大量细胞外的、不分支的细丝,大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差,经典的而且有效的方法是刚果红染色,1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别,并应用到组织切片,后来经过Highman改良,染色效果更好。
淀粉样物质染色液(甲紫法)主要由甲紫染色液、酸性分化液组成,是经Jurgens改良的一种异染色液,其染色原理是蛋白样物质中的酸性黏多糖与甲紫起异色反应。其优点是简便省时,其缺点是染色后的切片难以保存。
自备材料:
1、10%中性福尔马林固定液
2、甘油明胶
操作步骤(仅供参考):
1、常规固定,常采用10%中性福尔马林,常规脱水包埋,切片厚度4μm,常规脱蜡至水。
2、入甲基紫染色液3min,无需水洗,滴加酸性分化液分化,直至无染色液脱出。
3、稍水洗,甘油明胶封固。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
2、 尽量采用浸染,如果滴染,应置于湿盒防止溶液挥发。
3、 酸性分化液应密闭保存,分化步骤很重要。
4、 染片不能经乙醇脱水,否则易出现无法上色的问题。
5、 粘液物质甲紫染色时也会呈异染颗性红色,应注意鉴别。
6、 在镜下观察异染性反应时,应注意把蓝色滤光片移去。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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