阿利新蓝(Alcian)又称爱先蓝或阿尔辛蓝等,是一种类铜钛花青共轭染料,最初用于纺织纤维染色。这种阳离子染料与酸性基团结合,也即阿尔辛蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。阿利新蓝由中央含铜的酞菁环与四个异硫脲基通过硫醚键相连而成。该异硫脲基呈中度碱性,使阿利新蓝带阳离子。阿利新蓝使碳水化合物着色的确切机制不明,普遍认为是阳离子的异硫脲基通过静电与组织内的多聚阴离子相连,如含羧基和硫酸根的酸性黏液物质的羧基和硫酸根形成不溶性复合物,即染料分子中带正电荷的盐键和酸性黏液物质中带负电荷的酸性基团结合呈蓝色。
黏液HID-AB染色原理在于高铁二胺盐中的二铵盐与硫酸化酸性黏液物质结合,形成复合物而被显色。在pH值大大低于2.5时,组织内的硫酸根电离,带有一个负电荷,与阿利新蓝中的阳离子形成盐键,使带有硫酸根的组织(如硫酸黏液物质)染色,硫酸化酸性黏液物质等形成棕紫色至棕黑色。在pH值=2.5时,组织内的羧基电离,带有一个负电荷,与阿利新蓝中的阳离子形成盐键,使带有羧基的组织(如蛋白多糖/透明质酸以及上皮酸性黏蛋白)染色,唾液酸性黏液物质等形成蓝色。 黏液HID-AB染色液主要用于鉴别硫酸化酸性黏液物质和唾液酸性粘液物质,小肠上皮产生氮乙酰化诞液酸性黏液物质,大肠上皮产生氧乙酰化诞液酸性黏液物质和硫酸化酸性黏液物质。该法可配合AB-PAS染色,对肠上皮化生的类型进行鉴定,对转移性肿瘤发生黏液的类型进行鉴定,研究胃肠道肿瘤细胞的性质以及协助确定原发肿瘤是否来源于大肠。
自备材料:
1、 系列乙醇
2、 蒸馏水
操作步骤(仅供参考):
切片脱蜡至蒸馏水。
入配制好的HID Solution浸泡18~24h(见注意事项3)。
流水冲洗5min。
入Alcian染色液,染色10~20min。
稍水洗。
入核固红染色液,复染10min。
流水冲洗1min。
梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
注意事项:
固定液采用10%中性福尔马林。
HID Solution不宜提前配制。用后可存储于4℃,仍可用1~2次,但特异性不佳。
切片入HID Solution作用的适宜温度为20~25℃,如果环境温度过低,应适当延长染色时间。
HID Solution对人体有一定损害,请小心操作,避免接触人体皮肤。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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