含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素,为金黄色或棕黄色颗粒,因其含铁,且为金黄色,故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后,在溶酶体酶的作用下,血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞或间质内,主要显示三价铁盐。另外,Lillie法也是显示三价铁的很好地的方法,其特异性较好。
自备材料:
1、系列乙醇
2、蒸馏水
操作步骤(仅供参考):
组织固定于10%中性福尔马林或其他碱性固定液,常规脱水包埋。
切片厚度4μm,常规脱蜡至水。
蒸馏水水洗1min。
切片入Lillie stain (见注意事项4),浸染25~30min。
蒸馏水充分冲洗2~5min。
入核固红染色液,淡染细胞核5~10min。
蒸馏水冲洗1~5s。
常规脱水透明,中性树胶封固
阴性对照(可选):
取相同对照切片脱蜡至水。结果为阴性。
注意事项:
1、 该染色法适用于石蜡切片、冰冻切片和树脂切片,切片脱蜡应尽量干净。
2、 组织固定常采用10%中性福尔马林,经普通福尔马林长期固定后,组织会有损伤。避免使用酸性固定剂,铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
3、 整个操作过程中容器要干净,避免用金属铁制品,洗切片和容器时以蒸馏水为宜,因普通水内含铁质。
4、 Lillie stain染色时,应根据样本情况调整着色时间。
5、 所有切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。
6、 系列乙醇应经常更换新液。
7、 冰冻切片和细胞的染色,最好根据具体情况摸索实验条件。
8、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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