钙在人体内大量存在,构成骨骼作为支持人体的支架,在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用。钙在机体内以两种形式存在,一种是离子钙,存在血液循环内,即所谓血钙;另一种是结合钙,和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内。除骨骼和牙齿外,正常时钙渗透在所有组织和细胞中,一般不以固体状态出现在组织内。但在某些情况下,钙析出成固体并沉着于组织内,则为病理性钙盐沉着。沉着的钙盐主要是磷酸钙,其次为碳酸钙。钙盐通常是单折射的,但草酸钙是双折射的。当使用HE染色时,钙一般呈紫蓝色。许多染料可以于钙形成螯合物,包括茜素红S、红紫素、核固红等。茜素红S属一种蒽醌类衍生物,是茜素磺酸钠盐,它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。一般来说这些染料在识别中至大量的钙时,效果优于轻微染色的微量钙沉积。但茜素红S往往对少量的沉积物可得到更可靠的结果。
钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红S法,本染色液采用改良McGee-Russell法,用茜素红S和Mayer苏木素,钙盐和苏木素结合形成蓝紫色沉淀, 尤其适用于少量钙盐组织的染色。
自备材料:
1、10%中性福尔马林固定液
2、自来水
3、显微镜
操作步骤(仅供参考):
组织固定于10%中性福尔马林,常规脱水包埋。
切片厚5μm,常规脱蜡至水。
切片用茜素红S染色液滴染1~5min(见注意事项1)。
稍水洗。
McGee-Russell分化液迅速分化数秒。
Mayer苏木素染色液浅染胞核1~2min。
流水冲洗10min。
常规脱水透明,中性树胶封固。
注意事项:
茜素红S的染色时间要根据钙盐的含量来确定,应在显微镜下观察,见钙盐呈较深的橙红色即取出水洗,如染色时间过长,就出现弥散现象,一般1~2min即可。
经过茜素红S染色液染色后,钙沉积物是双折射的。
该方法在辨别和检测少量钙时特别有用如肾中的异常钙化(尿钙过多),其显示为橘红色。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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