核仁组成区(NORs)是染色体上的一个编码核糖体RNA(rRNA)的片段,存在于DNA特异性环上,凸向核仁。硝酸银染色法可确定组织切片上的核仁组成区,可显示与NORs有关的酸性蛋白。然而,这些银染色NOR相关蛋白(AgNOR)位点仅代表在每个核仁中的部分核仁组成区,并非全部。在电镜下,核仁组成区为在电子致密区中的境界不清的浅染区域。在石蜡切片上,在核仁中见到的每一个点状反应颗粒有可能代表多个AgNOR位点,这是因为正常或两性细胞核仁AgNOR易紧密聚集,所以银染色后,一个点状颗粒实际上是多个AgNOR的聚集。
核仁组成区嗜银蛋白染色主要特点是操作简便、批量染色的较为经济,AgNOR位点的数量增加与细胞增殖性增加有关,对于良恶性肿瘤的鉴别具有一定的意义。
自备材料:
1、10%中性福尔马林固定液
2、显微镜
3、蒸馏水
参考操作(仅供参考):
1、 切片脱蜡入水,再至蒸馏水。
2、 蒸馏水洗片。
3、 取室温的试剂(A)、试剂(B)等量混合,即为AgNOR染色工作液。室温孵育40~60min。
4、 蒸馏水洗片1min。
5、 (可选)甲基绿染色液复染1~3min,水洗凉干。
6、 常规脱水,常规透明,非水溶性封片剂封片。
注意事项:
1、 组织固定宜采用10%福尔马林或中性福尔马林。
2、 本染色液适用于石蜡切片,切片厚度在3~4μ为宜。
3、 如需复染,可在步骤4之后用中性红复染,但应注意避免过染。
4、 配制好的AgNOR染色工作液易退化,所以最好即配即用,不易久置。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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