脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一,在氧化时释放出能量。在正常情况下,除脂肪细胞外其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴,如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性,常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度,所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去,使脂质呈现出染液的颜色。
苏丹Ⅲ染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着,常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性,细胞内出现多数中性脂肪滴;鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。标本不采用含有乙醇的固定液(如需固定可采用10%中性福尔马林)、也不采用石蜡切片,需用冰冻切片或碳蜡切片。
自备材料:
1、70%乙醇
2、蒸馏水
3、显微镜
4、甘油明胶封固液
操作步骤(仅供参考):
1、 新鲜组织低温切片,一般-20℃~-25℃。如样本为脂肪瘤,应调节至-30℃。
2、 冰冻切片6~15μm(6~8μm为佳),贴于载玻片上。
3、 蒸馏水稍洗。
4、 入Mayer苏木素染色液,复染核1min。
5、 自来水洗后,苏丹Ⅲ分化液分化数秒,流水洗至核为蓝色。
6、 蒸馏水冲洗后,入70%乙醇稍微浸洗一下。
7、 入苏丹Ⅲ染色液,浸染30min。
注意事项:
标本不宜采用含有乙醇的固定液、也不宜用石蜡切片,需用冰冻切片。如需固定应采用10%中性福尔马林固定液或10%甲醛-钙液。
在染色过程中必须防止染料发生沉淀。故切片入染液时应密封,勿与流动空气相接触,避免溶液挥发时发生沉淀。
冰冻切片较易着色,Mayer苏木素复染时应避免过染。
苏丹染料容易褪色,应密闭保存。
甘油明胶封固的样本,保存时间不长。如需长期保存,可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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