脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料,最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂,较易与甘油三脂结合呈小脂滴状,与磷脂结合力稍差。
苏丹黑B染色液(细胞专用)简称SBB染色溶液,其原理是苏丹黑B属于脂溶性染料,可溶解于细胞质内的含脂结构中,使脂肪、磷脂、胆固醇等脂类现棕黑或深黑色,并定位于细胞质。神经磷脂、脑磷脂等行苏丹黑B染色后,呈阳性反应;肾透明细胞癌、卵巢纤维瘤等行苏丹黑B染色后,呈阴性反应。
自备材料:
1、载玻片
2、70%乙醇
3、蒸馏水
4、显微镜
操作步骤(仅供参考):
1、 制备新鲜骨髓、血液涂片,入SBB Fixative固定10~15min。
2、 取出涂片,放于流通的空气中10~15min。
3、 入新配制好的SBB Stain,室温(20~25℃)浸染60min。
4、 入Sudan black B stain,浸染1~2min。
5、 70%乙醇洗去多余染液,蒸馏水浸洗1min。
6、 Wright Stain染色20~30min。
阴性对照:取相同样本入乙醚、氯仿、丙酮等量混合液,溶解一般脂肪,然后用预冷丙酮溶解磷脂,再进行SBB染色,结果呈阴性反应。
注意事项:
标本不宜采用含有乙醇的固定液。
苏丹染料容易褪色,应密闭保存。
应防止染料发生沉淀,可置于血平皿内,两端放置小竹签,血膜向下架空染色。
神经磷脂、脑磷脂SBB染色呈阳性,有利于对类脂质沉积病的诊断。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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