脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。磷脂(phospholipid)由甘油、脂肪酸和含氮的碱基组成,是细胞膜和细胞内膜结构的主要组成成分,磷脂在大脑、神经组织、骨髓和肝脏等组织中含量较多,磷脂可分为卵磷脂、脑磷脂和神经鞘磷脂三种,显示磷脂的常用方法有酸性苏木红法、吡啶提取法。
磷脂染色液(酸性苏木红法)又称Baker磷脂染色液,能使磷脂受钙的作用阻留不能进入固定液,经Baker氧化液处理,使磷脂与金属离子结合成不溶性的磷脂螯合物,经酸性苏木红染色进而形成蓝黑色的复合物,磷脂、神经鞘磷脂呈蓝黑色。
自备材料:
1、 蒸馏水
2、 系列乙醇
3、 恒温箱或水浴锅
操作步骤(仅供参考):
组织固定于Baker甲醛钙固定液中16h(过夜)。
入Baker媒染液,于60℃恒温箱浸染24h。
流水冲洗16h(过夜)。
低温恒冷切片机或半导体制冷切片机切片,切片厚度8μm。
切片用蒸馏水水洗后,裱贴于载玻片,晾干。
切片再入Baker媒染液,于60℃恒温箱浸染1h。
流水稍洗,蒸馏水水洗。
切片入酸性苏木红染色液,置于37℃恒温箱浸染5h。
流水冲洗。
10、切片入Baker分化液,置于37℃恒温箱浸染18h。
11、流水冲洗10min,蒸馏水水洗。
11、甘油明胶封固。
注意事项:
该染色法有可能产生假阳性,如有必要可用脂质提取试剂进行预处理后,再进行上述染色。
酸性苏木红染色液不可反复使用。
分化液可反复使用,直到黄色变淡才丢弃。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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