姬姆萨色素(又称吉姆萨色素)是由天青Ⅱ与伊红混合而成。Giemsa染色原理和结果与瑞氏染色基本相同,姬姆萨染色液对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。 Giemsa Stain以进口的姬姆萨色素、甲醇为主要原料,含特有衬染剂,经研磨配制而成,能呈现出清晰的细胞染色效果,经常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
Giemsa Stain(1:9)由10×储存液和磷酸盐缓冲液组成,1:9混合成工作液后使用;亦可以分开使用,即先用Giemsa Stain染色,再经磷酸盐缓冲液处理,亦可以得到满意的染色效果。
自备材料:
1、 载玻片、显微镜
2、 蒸馏水
3、 甲醇
4、 0.1~0.5%乙酸
操作步骤(仅供参考):
(一)一步法涂片染色
Giemsa工作液的配制:
按试剂(A):试剂(B)=1:9混合,即取1份Giemsa Stain储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中充分混匀,即为Giemsa工作液,为即用型试剂,不易保存,即用即配。
常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定1~3min。
将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加Giemsa工作液覆盖涂片,室温滴染15~30min。
用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。
干燥、镜检。
(二)两步法涂片染色
1、 Giemsa工作液的配制:
按试剂(A):蒸馏水=1:4混合,即取1份的Giemsa Stain储存液(10×)加入到4份的蒸馏水中充分混匀,即为Giemsa工作液。Giemsa工作液为即用型试剂,不易保存,即用即配。
2、 常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定1~3min。
3、 将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加适量Giemsa工作液覆盖涂片,室温滴染10~15min。
4、 加入等量磷酸盐缓冲液,轻轻晃动载玻片,室温静置5~10min。
5、 用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。
6、 干燥、镜检。
(三)组织切片染色
1、 Giemsa工作液的配制:
按试剂(A):试剂(B) =1:9混合,即取1份Giemsa Stain储存液(10×)加入到9份磷酸盐缓冲液中充分混匀,即为Giemsa工作液。Giemsa工作液为即用型试剂,不易保存,即用即配。
2、新鲜组织立即置于Regaud固定液固定2天,期间应更换1次固定液。
3、3%重铬酸钾固定1天。
4、流水冲洗16个小时或过夜。
5、照常规脱水、包埋。
6、切片厚度约为5μm,常规脱蜡至水。
7、蒸馏水清洗2次,每次1min。
8、入含Giemsa工作液染缸,浸染18~24h。
9、蒸馏水稍微清洗。
注意事项:
血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,以免影响染色效果。
涂片染色中Giemsa染色后,请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。
如果染色过深或过浅,应调整染色时间或工作液浓度。
涂片染色和组织切片染色中,pH值对染色有一定影响,载玻片应清洁、无酸碱污染,以免影响染色效果。
染色液经稀释后液面应金属光泽则表示染液有染色作用,否则染色液可能失效。
组织切片染色中,染色后需用大量0.1~0.5%乙酸急速冲洗,避免浮面沉淀物污染切片后难以洗脱。
0.5%乙酸分化常用于Giemsa组织切片染色,如有必要亦可用于细胞涂片,但其浓度应适量下调。0.5%乙酸分化切片时,切片呈粉红色即可终止。
Giemsa组织切片染色中,无水乙醇脱水要迅速,否则切片易褪色。
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