细菌鞭毛是细菌的运动器官,幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境,这就是鞭毛运动作用的很好例证。通过鞭毛染色,可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置,鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。
鞭毛染色液(Leifson法)采用Leifson法,又称利夫森氏染色(Leifson’s flagella stain)法,试剂比较灵敏,操作简单,结果判断更可靠。
自备材料:
1、 酒精灯
2、 载玻片
3、 蒸馏水
4、 接种环
5、 显微镜
操作步骤(仅供参考):
1、 在洁净无油脂的载玻片上滴加2滴蒸馏水。
2、 用接种环挑取无菌蒸馏水,再与血平板上菌落接触,允许细菌游到接种环蒸馏水中,再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点2次。
3、 轻轻摇动玻片,使细菌分布均匀。切勿研磨和搅动,以防鞭毛脱落。
4、 置室温或35℃恒温箱内干燥固定。
5、 滴加刚配制的Leifson染色液于载玻片上,染色3~10min,当染色液的一半以上面积出现金属光泽膜时,用蒸馏水轻轻冲洗染色液,自然干燥。
6、 镜检:从涂片边缘开始,由外及里,逐渐移至中心。细菌分布少的地方,鞭毛容易观察。细菌密集的地方,鞭毛被菌体挡住,不易观察。
染色结果:菌体和鞭毛呈不同程度的红色。
注意事项:
1、 玻片应洁净,无油污。
2、 染色的菌种应连续传代多次,处于生长活跃期。
3、 染色过程应小心操作,防止鞭毛脱落。
4、 配制好的鞣酸染色液不宜久置,尽量在2h内使用。
5、 固定时不宜用高热火焰固定。
6、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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