分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色。分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后,就很难被酸性脱色液脱色,故名抗酸染色。传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色,其中最具代表性的是结核杆菌Ziehl-Neelsen染色法,该法是WHO和中国结核病防治规划中推荐的热染方法。
抗酸染色液(Ziehl-Neelsen热染法)属于热染色液,其染色原理是在加热条件下,分枝菌酸与复红结合成复合物,经亚甲蓝复染后,分枝杆菌仍然为红色,而其他细菌及背景中的物质为蓝色。该试剂盒更适用于冷染法效果不佳的情况。
自备材料:
1、 接种环
2、 载玻片
3、 蒸馏水
4、 显微镜
操作步骤(仅供参考):
1、 接种环挑取待检样本,涂布于载玻片上,涂片加热固定。
2、 滴加Ziehl-Neelsen复红染色液,用火焰微热至出现蒸汽,一般该染色过程至少5min (必要时应补加染液、以防止染液蒸发)。
3、 蒸馏水冲洗。
4、 用Ziehl-Neelsen脱色液脱色至无红色为止,一般1min即可。
5、 蒸馏水冲洗。
6、 用亚甲蓝染色液染色1min。
7、 蒸馏水冲洗。
8、 轻轻吸干水分,自然干燥。
9、 油镜镜检。
注意事项:
1、 每次使用后盖紧试剂瓶,以防试剂挥发和污染。
2、 上述试剂均对人体有刺激性,请注意适当防护。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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