分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色。传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后,就很难被酸性脱色液脱色,故名抗酸染色。其中最具代表性是结核杆菌Ziehl-Neelsen染色法,该法是WHO推荐热染的方法。
抗酸染色液(金胺O荧光法)属于荧光染色液,无需加热,相对较抗酸热染液安全。其染色原理是在室温条件下Auramine O染色以及复染后,用含有紫外光源的荧光显微镜检查,抗酸杆菌呈亮黄色,而其他细菌及背景中的物质呈暗黄色,这种方法可用低倍镜检,因此能更快速找出抗酸性菌。
自备材料:
1、 接种环
2、 载玻片
3、 蒸馏水
4、 荧光显微镜
操作步骤(仅供参考):
1、 接种环挑取待检样本,涂布于载玻片上,加热固定。
2、 滴加金胺O染色液,避光染色10~15min,水洗。
3、 用酸性脱色液脱色3~5min,直至涂片无黄色为止,水洗。
4、 用复染液染色2min,水洗。
5、 轻轻吸干水分,自然干燥。
6、 荧光显微镜下镜检。
注意事项:
1、 每次使用后盖紧试剂瓶,以防试剂挥发和污染。
2、 金胺O荧光易衰减,尽量避光操作。
3、 上述试剂均对人体有刺激性,请注意适当防护。
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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