布氏杆菌(Brucella)是一种革兰氏阴性的不运动细菌,牛、羊、猪等动物最易感染。布氏杆菌染色又称科兹洛夫斯基染色或柯兹洛夫斯基染色。
布氏杆菌染色液采用沙黄为染色剂, 临床标本直接涂片,背景干净,胞核胞质对比强烈,胞内吞噬体清晰易辨认,细菌染色特征典型。所有操作应置于二级生物安全柜中进行,一旦发现绿色细菌中有红色点状细菌,应高度怀疑为布氏杆菌,及时通知CDC,防止疫情扩散。
自备材料:
1、 接种环或挑取细菌的其他工具。
2、 酒精灯
3、 载玻片
4、 光学显微镜
操作步骤(仅供参考):
1、 涂片:取待检细菌,于载玻片中央涂成薄层,尽量薄。如果需做对照,可以将大肠杆菌与待检细菌混合涂片。
2、 干燥:涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥。
3、 固定:手持载玻片一端,标本面朝上,在酒精灯的火焰外侧快速来回移动3~5次,每次1s,温度不宜过高,防止菌体蛋白变性,放置待凉后染色。
4、 染色:滴加沙黄染色液染色,在酒精灯的火焰上微微加热至出现蒸汽为止,通常需要30~60s。
5、 清水洗去染色液。
6、 复染:滴加复染液染色2~3min。
7、 水洗, 吸干。
8、 镜检。
注意事项:
1、 涂片之前应事先在背面做好圆圈标记,以便判断后续试验的位置。
2、 取细菌时,应注意自我防护,拔或塞试管塞时,应将试管口通过火焰略加烧灼,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
3、 加热固定涂片时,应注意玻片勿太靠近火焰,一般要求玻片温度不超过60℃,以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜。
4、 待检细菌培养时间也会影响染色,阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解,都常呈阴性反应。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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