Warthin-Starry银染色是Warthin和Starry在1920年用于显示螺旋体的染色法,其染色原理在于螺旋体表面的黏蛋白与银结合,呈黑色。该染色法对比清楚,染片可以长期保存,但操作较为麻烦耗时。
Warthin-Starry银染色采用酸性硝酸银,可以显示螺旋体、幽门螺旋杆菌、猫抓病球杆菌、鼻硬结杆菌、真菌、神经纤维、黑色素颗粒等。推荐采用亚甲蓝法不佳的情况下,采用Warthin-Starry银染色法对慢性胃炎和消化性溃疡的诊断和治疗效果的判断,作为鉴别幽门螺旋杆菌的染色方法。
自备材料:
1、10%福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、染色缸、染色架
4、水浴锅或水浴箱
操作步骤(仅供参考):
1、 组织固定于10%福尔马林,常规脱水包埋。
2、 切片厚4~6µm,常规脱蜡至水。
3、 蒸馏水浸洗切片1min,再重复2次。
4、 切片入酸性硝酸银溶液(加盖),56℃水浴染色1h或43℃ 4~24h。
5、 在上述染色过程中配制Warthin-Starry染色液,按B1:B2:B3=3:9:4混合,即为Warthin-Starry染色液。取出切片入Warthin-Starry染色液(加盖),置于56℃水浴染色至切片呈淡黄棕色时取出,平放在染色架上,用预热至56℃的自来水彻底清洗。
6、 自来水冲洗5min。
7、 常规脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
注意事项:
1、 尽量采用玻璃器皿,并且尽量用硫酸洗液浸泡并冲洗干净。
2、 Warthin-Starry染色时间很关键,染色时间过短导致细菌染色过浅,染色时间过长导致背景深棕,对比不清楚。可行的控制染色时间的方法是同时染色多张切片,而Warthin-Starry染色时间不同,做梯度比较。
3、 根据不同的病种选择不同的孵育时间,如幽门螺旋杆菌56℃ 1h或43℃ 4h,螺旋体、鼻硬结杆菌、尘埃颗粒染色时间应相应延长。
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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