革兰氏染色法是丹麦医生Christain Gram于1884年所发明,是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,亦是一种复染法。未经染色的细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,用以分类鉴定。
沙黄复染液主要由沙黄组成,多与结晶紫、碘液配合使用,检测革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
自备材料:
1、 载玻片、盖玻片
2、 酒精灯
3、 光学显微镜
操作步骤(仅供参考):
1、 涂片:取待检细菌,于载玻片中央涂成薄层或者或在载玻片上滴加少许无菌水,取菌与的水混合均匀,涂成一薄层。
2、 干燥:涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥。
3、 固定:手持载玻片一端,标本面朝上,在酒精灯的火焰外侧快速来回移动3~5次,每次1s,温度不宜过高,防止菌体蛋白变性,放置待凉后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。
4、 初染:滴加结晶紫染色液染色1~2min,清水冲洗去染色液。
5、 媒染:滴加Gram碘液,并覆盖载玻片,室温放置1~2min,水洗。
6、 脱色:滴加脱色液,摇动10~30s,直至流下的脱色液不出现紫色时为止,立即用水冲去脱色液,终止反应。
7、 复染:滴加沙黄染色液染色30~60s,水洗。
8、 加盖洁净的盖玻片,轻轻按压制成压片。
注意事项:
1、 涂片之前应事先在背面做好圆圈标记,以便判断后续试验的位置。
2、 待检细菌培养时间会影响染色,阳性菌培养过长或已死亡或细菌溶解,都常呈阴性反应。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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