线粒体是细胞能量的来源,其形态可以有较大的变化(从杆状到圆形)。线粒体体积很小,只有借助电子显微镜才能观察到。线粒体包含遗传性母体DNA。其数量、大小和形状根据动物细胞类型而有差异。观察线粒体的最佳方式是用电子显微镜, 组织病理学方法如Altmann技术是有帮助的。用组织化学方法成功显示线粒体取决于以下几个因素:组织必须新鲜固定,切片薄(2~3μm)。由于当细胞缺氧或死亡后线粒体是发生退行性变最早的细胞器之一,快速固定至关重要。
线粒体染色以Champy-Kull方法结果最好,但是染色技术较复杂,Heidenhain铁苏木素方法需要精确分化。 Altmann品红方法较简单,但也应注意控制分化的程度。
自备材料:
1、固定液:Champy固定液或Helly固定液
2、自来水
3、无水乙醇
操作步骤(仅供参考):
组织固定,推荐使用Champy固定液,但Helly固定液效果也较好。
切片脱蜡至水。
将切片浸泡于Aniline品红染色液, 稍微加热切片至有热气出现,放置5min。
自来水冲洗切片。
用Aniline分化液A分化至过染的红色褪去。
用Aniline分化液B分化,应显微镜下控制染色程度。
无水乙醇快速脱水2次。
二甲苯透明,非水溶性封片剂封片。
注意事项:
应仔细分化,以使背景呈黄色。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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