基底膜六胺银(methenamine silver)染色是一种经典显示基底膜的方法。组织经过碘酸氧化,使基底膜内的黏多糖暴露出醛基,醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金,同时使背景更清晰。海波可以固定并洗去未还原的银离子。六胺银染色能清晰地显示基底膜,在肾病变中应用最多,常用来观察肾小球毛细血管基底膜在炎性损伤时如断裂、增生、折叠等形态改变。
自备材料:
1、 蒸馏水
2、 水浴锅或水浴箱
3、 系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
1、切片脱蜡至水洗。
2、切片入过碘酸溶液氧化15min。
3、自来水洗、蒸馏水洗2min。
4、入铁明矾溶液染色10min。
5、自来水洗、蒸馏水洗2min。
6、入配制好的六胺银工作液中,60℃水浴染色大约25~30min,切片呈烟草黄色或黑色为止。
7、入蒸馏水中清洗。
8、用氯化金溶液调色1~2min。
9、蒸馏水洗2 min。
10、置于海波溶液1 min。
11、自来水洗。
12、用淡绿溶液复染1 min。
13、自来水洗。
14、95%乙醇开始脱水,二甲苯透明,中性树胶封封固。
注意事项:
1、实验中所用玻璃器皿,应预先放入洗液浸泡过并冲洗干净,烤干。
2、六胺银工作液配制后可放人温箱中预热,温度要达到60℃时,再放人切片进行染色。
3、配制好的六胺银工作液是一次性的,不能久放。
4、氯化金调色时,一定要在显微镜下观察。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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