固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液或FAA、AFA固定液,主要由乙醇(A)、乙酸(A)、甲醛(F)组成,兼有脱水作用。AAF固定液常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。
操作步骤:
1、 取新鲜组织入AAF固定液,置于冰箱内低温固定10~30min。
2、 常规石蜡切片因固定不佳导致染色效果不满意时,可在染色前再用AAF固定液固定5min,染色效果会有明显提高。
注意事项:
AAF固定液对人体有一定的损害,请在通风好的环境下小心操作, 避免吸入。
固定液pH最好接近用中性,pH范围6~8。
组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm,一般不超过6mm。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
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