固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。未固定前活细胞被包裹在不能穿透的膜内,固定剂能够破坏这一屏障,使大分子物质穿透膜、逸出。选择固定液对组织染色和免疫组化染色都极其重要,通常将几种固定剂混合配制成复合固定液,这样可以适应多种组织、细胞成分的保存,然而目前还没有一种标准的固定液适用于所有的组织、细胞成分的保存。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
Clarke固定液(Clarke Fluid)又称Clarke溶液,主要乙醇、乙酸混合而成,固定后对于HE染色有较好的组织学形态。其优点是可以保护核酸,其缺点是①易脱去油脂,因此不适宜脂肪染色的固定;②适用于短期固定,并且固定后应将组织移到95%中。
操作步骤:
1、 按实验具体要求操作。一般仅需固定30~60min。如果组织块大,可适当延长固定时间,但不宜超过24h。固定后,应将组织移到95%中。
注意事项:
组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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