固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。选择固定液对组织染色和免疫组化染色都极其重要,通常将几种固定剂混合配制成复合固定液,这样可以适应多种组织、细胞成分的保存。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
Orth固定液(Orth Fluid)属于重铬酸盐固定液,主要由重铬酸钾、硫酸盐、甲醛等组成,经Orth固定液固定的组织,线粒体、高尔基器、核分裂的染色效果较好。
操作步骤:
1、 临用前,按试剂(A):试剂(B)=10:1充分混合,即为Orth Fluid,即配即用,不宜保存。
2、 一般需固定24h,固定后流水冲洗转70%的乙醇脱水。
注意事项:
组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm,一般不超过6mm。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后应及时固定并冲洗,未及时冲洗的组织可引起组织内色素沉着。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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