固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。未固定前活细胞被包裹在不能穿透的膜内,固定剂能够破坏这一屏障,使大分子物质穿透膜、逸出。选择固定液对组织染色和免疫组化染色都极其重要,通常将几种固定剂混合配制成复合固定液,这样可以适应多种组织、细胞成分的保存,然而目前还没有一种标准的固定液适用于所有的组织、细胞成分的保存。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
PLP固定液(PLP Fluid) 又称过碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛固定液,主要由过碘酸钠、赖氨酸、多聚甲醛等组成,多用于含糖类组织的固定,尤其适用于免疫电镜中保护抗原性和超微结构。
操作步骤:
1、 按实验具体要求操作。
2、 一般需固定6~18h。如果组织块大,可适当延长固定时间,但不宜超过24h。
注意事项:
PLP Fluid对人体有一定的损害,请在通风好的环境下小心操作, 避免吸入。
组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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