固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
多聚甲醛溶液(4% PFA)主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,pH为7.4,该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定,是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一,它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及核酸。
操作步骤:
1、 一般组织固定时间控制在4~12h,大标本应适当延长固定时间,培养细胞或细胞爬片固定时间控制在10~15min,特殊情况除外。
2、 10×10ml、10×30ml规格的产品,可固定后直接放入试剂瓶,4℃长期保存。
注意事项:
多聚甲醛溶液(4% PFA)有一定刺激性和腐蚀性。一经开启,储存过久固定效果易下降。
避免过度延长固定时间,否则引起生物大分子过度交联。取材厚度不同,固定时间也不同。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
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