固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
多聚甲醛-蔗糖溶液(20%)由4%多聚甲醛、磷酸盐、20%蔗糖组成,pH为7.4,该固定液适合于特殊要求的细胞或组织的固定,亦可作为特殊样本的脱水剂。
操作步骤:
按实验具体要求操作。
注意事项:
多聚甲醛溶液有一定刺激性和腐蚀性,请在通风环境下小心操作。
一经开启,尽快用完,储存过久的液体固定效果易下降。
避免过度延长固定时间,否则易引起细胞内生物大分子过度交联。
组织取材的厚度不同,固定时间也不同。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
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