固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
乙醇-福尔马林-醋酸固定液主要由乙醇、福尔马林、乙酸组成,该固定液属于脱水-交联固定剂,在辨认特定抗体的免疫组化反应中能产生极好的结果,也有利于含有多量脂肪的大样本固定。
操作步骤:
1、按实验具体要求操作。一般标本固定时间控制1~4h/mm,大多数控制在4~24h,大标本应适当延长固定时间。
注意事项:
乙醇-福尔马林-醋酸固定液有一定刺激性和腐蚀性,请在通风环境下小心操作。
组织取材的厚度不同,固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm,一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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