固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
荧光示踪灌注固定液主要由甲醛、蔗糖、鞣酸、硫酸镁等组成,固定均匀,组织收缩轻微。
操作步骤:
1、按实验具体要求操作。
2、灌注完毕迅速取出组织,固定6h。如果组织块大,可适当延长固定时间,但不宜超过24h。固定后置于10%的蔗糖溶液,使组织块完全下沉后切片。
注意事项:
荧光示踪灌注固定液对人体有一定的损害,请在通风好的环境下小心操作, 避免吸入。
组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
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