组织在制作过程中由于化学试剂的作用封闭了抗原,又由于热作用致使部分抗原的肽链发生扭曲,致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来,为了解决上述的问题,利用化学试剂和热作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。柠檬酸盐、EDTA、Tris等缓冲液在热的条件下可以使被福尔马林固定液屏蔽的抗原重新暴露出来,同时又不会对抗原表位造成破坏,从而提高抗原的检出率,降低背景染色,提高诊断的准确率。 抗原修复有多种方法,主要方法可简要归纳为加热修复和非加热抗原修复两大类。非加热抗原修复方法包括酶消化、真空负压、酸水解等方法。目前主要是酶消化法,酶消化是以化学的方法来打断醛键,修复抗原。在免疫组织与免疫组织化学中,有时经福尔马林等醛基固定液过度固定的标本,常会产生过量的醛基遮盖抗原,影响一抗与抗原的结合。真空负压原理在于通过负压、高热来促进醛基的断裂,该法常被用于较难修复的抗原。
操作步骤:
切片脱蜡至水。
切片入H2O2甲醇溶液处理切片5min。
自来水洗,蒸馏水洗。
将切片浸入真空负压抗原修复液中,连同容器一起放入提前预热至95℃的真空负压干燥器,处理10min。
待修复液恢复至室温,PBS清洗3次,按选好的免疫组化染色方法进行染色。
注意事项:
由于组织固定方法和时间长短与强度不同,抗原修复所需的时间会有很大差异,实验人员应依据免疫染色的结果相应的调整。
本品不含防腐剂,一经开启不宜4℃长期保存。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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